一种同时进行牛囊胚差异染色和凋亡染色的方法

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.11.008

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (11): 1967-1973.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.11.008

一种同时进行牛囊胚差异染色和凋亡染色的方法

孙尉峻¹，于学颖^1，2，胡庭溪^1，3，郭芹芹¹，刘岩¹，郝海生¹，赵学明¹，朱化彬¹，杜卫华^1*

（1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193；2.河北工程大学，邯郸 056000；3.甘肃农业大学，兰州 730070）

收稿日期:2015-02-16 出版日期:2015-11-23 发布日期:2015-11-23
通讯作者: 杜卫华，博士，副研究员，E-mail：dwh@iascaas.net.cn
作者简介:孙尉峻（1989-），男，河北张家口人，硕士生，主要从事家畜胚胎工程研究，E-mail：sunweijunet@163.com
基金资助:
基本科研业务费重点项目（2013ywf-zd-2）；国家科技支撑项目（2012BAD12B01-2）；家畜胚胎工程与繁殖创新团队（ASTIP-IAS06-2015）

A Method Used for Differential Staining and Apoptosis Cell Staining in Bovine Blastocyst

SUN Wei-jun¹，YU Xue-ying^1，2，HU Ting-xi^1，3，GUO Qin-qin¹，LIU Yan¹，HAO Hai-sheng¹，ZHAO Xue-ming¹，ZHU Hua-bin¹，DU Wei-hua^1*

（1.Institute of Animal Science，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100193，China；2.Hebei University of Engineering，Handan 056000，China；3.Gansu Agricultural University，Lanzhou 730070，China）

Received:2015-02-16 Online:2015-11-23 Published:2015-11-23

摘要/Abstract

摘要：

旨在优化双重荧光染色方法的基础上，建立囊胚的三重免疫荧光染色方法，以期更经济、高效、准确地评估胚胎质量。三重免疫荧光染色方法分别用CDX2蛋白、caspase-3蛋白和Hochest 33342标记囊胚的滋养层细胞、凋亡细胞和所有细胞的细胞核，共3种染色方案。双重荧光染色方法采用PI染色滋养层细胞，或通过TUNEL法进行凋亡细胞染色；而囊胚细胞的细胞核用Hochest33342染色。结果表明，三重免疫荧光染色方法获得的图像清晰，能准确地标记囊胚中的各类细胞。另外，比较3种染色方案的准确性、复杂性及染色效果，确定两种一抗或两种二抗共同孵育的方案准确度高、效果好、且用时最短，为最佳染色方案。综上表明，在同一枚囊胚中，通过标记CDX2和caspase-3蛋白来鉴定其滋养层细胞和凋亡细胞，并进行囊胚质量的评估是可行的，而且较双重荧光染色有较大的优势。

Abstract:

To evaluate the quality of bovine blastocysts efficiently and accurately，a triple immunofluorescence staining method was established in bovine blastocyst.The trophectoderm(TE) cells and apoptotic cells were identified with labeling of CDX2 protein and caspase-3 protein，respectively.All of nuclei in blastocyst cells were stained with Hochest 33342.Triple staining was designed as 3 schemes.PI was used to stain nuclei of TE cells and apoptotic cells were detected by TUNEL method in double staining.The results showed that the triple immunofluorescence staining，with 3 schemes，could distinguish the TE and apoptotic cells accurately.Additionally，co-incubation of 2 first antibodys/second antibodys was the most optimal method to triple staining in terms of accuracy，efficiency and stain duration.Therefore，in same blastocyst，identification the TE and apoptotic cells by labeling CDX2 and caspase-3 protein respectively was available to evaluate the quality of bovine blastocysts.Also，there were great advantages in triple staining compared with double staining.

中图分类号:

S823
S813

孙尉峻，于学颖，胡庭溪，郭芹芹，刘岩，郝海生，赵学明，朱化彬，杜卫华. 一种同时进行牛囊胚差异染色和凋亡染色的方法[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(11): 1967-1973.

SUN Wei-jun，YU Xue-ying，HU Ting-xi，GUO Qin-qin，LIU Yan，HAO Hai-sheng，ZHAO Xue-ming，ZHU Hua-bin，DU Wei-hua. A Method Used for Differential Staining and Apoptosis Cell Staining in Bovine Blastocyst[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(11): 1967-1973.

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A Method Used for Differential Staining and Apoptosis Cell Staining in Bovine Blastocyst

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